Un ejemplo de un microorganismo con cierta capacidad recombinante es el Mycobacterium semegmatis, dado que su la capacidad de patogénica fue muy evidente, por lo que mediante este experimento se utilizó al Mycobacterium tuberculosis que produce PE_PGRS41 que al estar en contacto con la M. semegmatis provoco que esta se volviera patógena, haciendo que todos los macrófagos infectados bajara la producción de TNF-α, IL-1β e IL-6, además de que todos los macrofagos infectados con M.S. presentaron una mayor muerte celular por apoptosis celular y autofagia. Se concluyó que PE_PGRS41 es suficiente para dar capacidades patogénicas a M.S. (1).
Tema: Ingeniería del SARS-CoV-2 utilizando un sistema genético inverso.
Objetivo: El sistema genético inverso se puede utilizar para diseñar rápidamente virus con las mutaciones deseadas para estudiar el virus in vitro e in vivo.
Gen a clonar: ADNc infeccioso (icSARS-CoV-2).
Enzimas de restricción: BsaI-HFv2, Esp3I,Esp3I, SnaBI.
Enzima ligasa: ADN ligasa T4 y de tampón de ligadura.
Vector: Plásmido derivados del Vector pUC57, Vector pCC1.
Célula receptora: Células Vero B6, BHK-21.
Mecanismo de trasferencia: Conjugación bacteriana.
Método de identificación de clones: Electroforesis (BIO-RAD), RT-PCR, cultivo de bacterias (Fisher scientific), secuenciación, amplificación (2)
Referencias:
- Deng, W., Long, Q., Zeng, J. et al. Mycobacterium tuberculosis PE_PGRS41 mejora la supervivencia intracelular de M. smegmatis dentro de los macrófagos mediante el bloqueo de la inmunidad innata y la inhibición de la defensa del huésped. Sci Rep 7, 46716 (2017). https://doi.org/10.1038/srep46716
- Xie X, Lokugamage KG, Zhang X, Vu MN, Muruato AE, Menachery VD, Shi PY. Ingeniería del SARS-CoV-2 utilizando un sistema genético inverso. Nat Protoc. 2021 Marzo;16(3):1761-1784. DOI: 10.1038/S41596-021-00491-8. Epub 2021 Enero 29. PMID: 33514944; PMCID: PMC8168523.
No hay comentarios:
Publicar un comentario